Os efeitos da Punica granatum L. em diferentes concentrações sobre duas linhagens celulares: estudo in vitro / The effects of Punica granatum L. at different concentrations on two cell lines: in vitro study

Introdução: A Punica granatum L. (PG), utilizada como medicamento fitoterápico, apresenta propriedades terapêuticas, anti-inflamatórias e antioxidante. Embora diversos estudos já tenham sido realizados com este fitoterápico, seus possíveis efeitos citotóxicos nos tecidos humanos ainda não são claros. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade da PG por meio de cultura celular com duas linhagens: fibroblastos humanos de mucosa oral (FLM) e células de carcinoma epidermoide oral humano (KB). Material e método: As células foram submetidas ao teste de viabilidade celular por 24 horas nas concentrações da PG 1%, 0,50%, 0,25%, 0,125%, 0,062% e 0,031%, e aos testes de citotoxicidade celular em 4 horas, 1, 3, 5 e 7 dias, em diferentes concentrações, realizados em triplicata. Foi utilizado um controle negativo (Triton 1%) e um controle positivo sem o extrato de PG. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA (p < 0,05). Resultado: Foi possível observar que o extrato da PG possui efeitos inibitórios, apresentando-se maior nas células KB em relação às FLM. Os testes de citotoxicidade e viabilidade mostraram inibição e morte das células KB e FLM nas concentrações 1%, 0,50% e 0,25%. Conclusão: O efeito inibitório da PG foi dose-dependentes, mostrando-se maior nas células KB em relação às FLM.

Introduction: Punica granatum L. (PG), used as a herbal medicine, has therapeutic, anti-inflammatory and antioxidant properties, although several studies have already been carried out with this herbal medicine, its possible cytotoxic effects on human tissues are still unclear. Objective: To evaluate the cytotoxicity of PG through cell culture with two strains: human oral mucosa fibroblasts (LFM) and human oral squamous cell carcinoma (KB) cells. Material and method: The cells were submitted to the cell viability test for 24 hours in the concentrations of PG 1%, 0.50%, 0.25%, 0.125%, 0.062% and 0.031% and the cell cytotoxicity tests in 4 hours, 1, 3, 5 and 7 days in different concentrations, performed in triplicate. A negative control (Triton 1%) and a positive control without the PG extract were used. The data obtained were submitted to ANOVA (p <0.05). Result: it was possible to observe that the PG extract has inhibitory effects, being higher in KB cells in relation to LFM. The cytotoxicity and viability tests showed inhibition and death of KB and FLM cells at concentrations of 1%, 0.50% and 0.25%. Conclusion: The inhibitory effect of PG was dose dependent, showing itself to be greater in KB cells compared to LMB.

Citotoxicidade da Punica granatum L. (romã) sobre cultura de fibroblastos e de células de linhagem cancerígena / Cytotoxicity of Punica granatum L. (pomegranate) a fibroblast cell line and a carcinoma cell line

Embora diversos estudos já tenham sido realizados sobre a Punica granatum L., seus possíveis efeitos citotóxicos não são bem conhecidos. No presente trabalho foi avaliada a toxicidade da Punica granatum L. (PG) por meio de cultura celular com duas linhagens: fibroblastos humanos de mucosa oral (FLM) e células de carcinoma epidermóide oral humano (KB). As células foram submetidas ao teste de viabilidade celular por 24 horas em placas de 96 poços nas concentrações da PG (1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,062% e 0,031%) e aos testes de citotoxicidade celular em placas de 24 poços, em cinco períodos diferentes (4 horas, 1, 3, 5 e 7 dias) e com quatro diferentes concentrações (1%, 0,5%, 0,25%, 0,062%). Todos os testes foram realizados em triplicata e em três momentos diferentes. Foram adicionados dois grupos, um controle negativo (Tryton 10%) e um controle positivo constituído de meio de cultura acrescido de soro bovino fetal 10% e sem o extrato de PG. A quantificação celular foi realizada pelo método do Resazurin, com avaliação por espectrofotometria óptica (espectrofotômetro UVM340 - AsysHitech GmbH) e leitura de absorbância dos comprimentos de onda de 570 nm a 600 nm. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA (5%). Os resultados de viabilidade mostraram que nas concentrações de 0.031%; 0,062%; 0,125%; 0,25% e 0,05% o extrato de PG inibiu a viabilidade celular (≥ 40%) principalmente das células KB. O teste de citotoxicidade mostrou que apenas as culturas tratadas com PG a 0,062% exibiram citotoxicidade para as linhagens celulares. A PG a 1% foi tóxica para as células FLM e KB. O extrato de PG inibiu a citotoxicidade celular nas demais concentrações testadas. Estes resultados podem ser relacionados a propriedade anti carcinogênica da Punica granatum L.

Several studies have been conducted on Punica granatum L., but their cytotoxic effects are not well known. The purpose of this study was to evaluate the cytotoxicity of Punica granatum L. extract (PG) in two cell lines: human oral mucosa fibroblasts (FLM) and cells of human oral squamous cell carcinoma (KB). The cells were analized to viability on 24 h using different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.125%, 0.062% and 0.031%) and to cell proliferation in five different periods (4 h, 1, 3, 5 and 7 days) using four different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.062%). All tests were performed in triplicate and in three different times. There were a negative control (Tryton 10%) and a positive control (culture medium plus 10% SBF, without PG extract). Cell quantification was performed by the Resazurin method, with evaluation by optical spectrophotometry (spectrophotometer UVM340 - Asys Hitech GmbH) and measure of absorbance at a wave length of 570 nm to 600 nm. Data were submitted to ANOVA (5%). The results showed inhibition of cell proliferation in 0,031%, 0.062%, 0.125%, 0.25% and 0.05% concentrations of PG extract (≥ 40%) specialty to KB cells in comparison to FLM cells. PG 1% was toxic to KB and FLM cells. The proliferation test showed cell proliferation only when using PG 0,062%, for both cell lines and inhibited proliferation whith all other PG concentrations. These effects might be related to the anticarcinogenic properties of PG.

Particularidades na utilização de animais no ensino e na pesquisa científica / Particularities in the use of animals in education and the scientific research

O Brasil não possui uma legislação específica que regule a criação e o uso de animais para a pesquisa e o ensino em âmbito nacional, sendo que, muitas vezes, a ética e o bom senso de nossas instituições e pesquisadores prevalecem e norteiam muitas pesquisas com animais. Descrever a regulamentação para o uso de animais na pesquisa científica no Brasil e orientar o pesquisador sobre alguns comitês do Estado de São Paulo. Para a execução deste estudo, foi realizada uma revisão sobre o tema por meio de periódicos e websites sobre legislação existente no Brasil e sobre comitês de ética para a experimentação animal do estado de São Paulo. Não existe norma sistematizadora atualizada referente à vivisseção e experimentação com animais. A única lei referente a esse tópico é de 1979 e não chegou a ser regulamentada. Leis mais recentes preocupam-se com a prática de experimentos científicos aos maus tratos de animais, na presença de tecnologia alternativa. No Estado de São Paulo, os comitês adotam fundamentos baseados no Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (Concea). Ainda não existe uma regulamentação para a utilização de animais no ensino e na pesquisa científica em nosso país. As instituições vinculadas ao Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (Cobea) deverão manter comissões de ética operantes que avaliem a necessidade de uso de animais e que, sobretudo, vigiem como o animal está sendo mantido e manipulado durante e após o término do experimento.

Prótese nasal / Nasal prosthesis

Na estética facial, o nariz é um elemento de grande importância, pois, além de aquecer, umidificar e purificar o ar, adequando-o para chegar ao pulmão, define a fisionomia, auxiliando na individualização de cada pessoa. Pela sua localização exposta e projetada na face, qualquer alteração morfológica quebra a harmonia do rosto e a ausência da pirâmide nasal pode causar conflitos interiores capazes de desequilibrar o sistema emocional do indivíduo. O tratamento cirúrgico dos tumores malignos, quase sempre, deter mina mutilação, podendo resultar na perda total ou parcial da pirâmide nasal. Embora psicologicamente o método reparador cirúrgico seja mais bem aceito pelos pacientes, determinadas condições locais elou gerais podem impossibilitar o mesmo, tornando o tratamento protético o único possível. Neste relato de caso clínico, os autores apresentam os passos da confecção de uma prótese nasal, realizada em silicone, para reparar a perda total da pirâmide nasal decorrente de cirurgia oncológica.

On facial aesthetics, the nose has an important role, since besides its functions of air heating, humidification and purification, defines the physiognomy, contributing to the subject individualization. For it's localization displayed and projected in the face, any morphologic alteration breaks the harmony of the face and the absence of the nasal pyramid can cause interior conflicts capable to unbalance the individual's emotional system. The surgical treatment of the malign tumors usually means mutilation, and can result in the full or partial loss of the nose pyrarnid. Although the surgical reparative procedures are psychologically better accepted by the patients, some local or systemic conditions can forbid these, giving the prosthetic treatment as the only choice. In this case report, the authors present the steps for a making of a nasal prosthesis, constructed in silicone, in order to repair a full loss of a nasal pyramid, resulted from a surgical oncological treatment.

Comparative therapeutic use of Risedronate and Calcarea phosphorica - allopathy versus homeopathy - in bone repair in castrated rats / Comparação do uso terapêutico de Risedronato e Calcarea phosphorica - alopatia versus homeopatia - no reparo ósseo em ratos castrados

Osteoporosis, a disease characterized by progressive bone loss, has been the target of several studies in the past few years. It results in a much higher risk for fractures and might cause slower bone lesion healing. The aim of this work was to study the effects of Risedronate (allopathic medicine) and Calcarea phosphorica 6CH (homeopathic medicine) on the repair of bone lesions in male rats with osteoporosis induced by castration. Eighty-four three-month-old rats were used divided into four groups of twenty-one animals each. Three groups where castrated and one group was submitted to Sham surgery. One month later, cortical lesions were made in all animals' tibiae and, after one day, the different experimental treatments began according to the following groups: CR - castrated/Risedronate (1 mg/kg/day); CCp - castrated/Calcarea phosphorica 6CH (3 drops/day); CP - castrated/placebo and SP - Sham/placebo. The animals were sacrificed at seven, fourteen and twenty-eight days after the beginning of the treatments and had their tibiae removed. Digital radiographs of the tibiae were taken and analyzed in order to evaluate the optical density of the defect area. Then, they were decalcified and processed for histological and histomorphometrical analysis. The data were submitted to ANOVA, and to the Tukey and Dunnett tests (5 percent). The allopathic and homeopathic treatments led to different bone formation as regards remodeling and maturation aspects. Further research is necessary to access the resistance and quality of the newly formed bone.

A osteoporose, doença caracterizada pela perda de massa óssea, tem sido alvo de estudos nos últimos anos. Fraturas decorrentes da osteoporose são muito comuns e podem apresentar consolidação mais lenta. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do risedronato (medicamento alopático) e da Calcarea phosphorica 6CH (medicamento homeopático) no reparo de lesões ósseas em ratos com osteoporose induzida por castração. Para tanto, foram utilizados oitenta e quatro ratos, com três meses de idade, separados em quatro grupos de vinte e um animais, sendo três grupos submetidos à castração e um grupo a falsa cirurgia ("Sham"). Um mês após a cirurgia, foram realizadas lesões corticais na tíbia de todos os animais e, a partir do dia seguinte, os tratamentos experimentais foram iniciados de acordo com os seguintes grupos: CR - castrado/risedronato (1 mg/kg/dia); CCp - castrado/Calcarea phosphorica 6CH (três gotas/dia); CP - castrado/placebo e SP - "sham"/placebo. Os animais foram sacrificados aos sete, catorze e vinte e oito dias após o início do tratamento e as tíbias foram removidas. Radiografias digitais foram realizadas e avaliadas para obter a densidade óptica na área do defeito. Em seguida, foram descalcificadas e processadas para análise histológica e histomorfométrica. Os dados foram submetidos a ANOVA e aos testes de Tukey e Dunnett (5 por cento). Os tratamentos alopático e homeopático levaram a formação óssea de aspecto diferente considerando a remodelação e maturação. Mais pesquisas são necessárias para avaliar a resistência e qualidade do osso neoformado.

Efeitos do risedronato na reparação óssea de ratos machos e fêmeas com osteopenia / Effects of risedronate in bone repair of male and female rats with osteopenia

O objetivo deste trabalho foi avaliar histomorfológica e morfometricamente a ação do risedronato na reparação óssea de ratos com osteopenia. Utilizaram-se trinta ratos machos e trinta fêmeas castrados e após um mês deste procedimento, confeccionou-se um defeito ósseo de 3mm de diâmetro nas tíbias direitas dos animais. Estes foram divididos em quatro grupos: I (machos controle); II (machos tratados); III (fêmeas controle); IV (fêmeas tratadas). Administrou-se nos grupos II e IV, após execução do defeito, 0,1mg/Kg/dia de risedronato na água de beber, durante cinco dias e nos grupos I e III, somente água. O sacrifício dos animais ocorreu sete, 14 ou 28 dias após a realização do defeito. Os cortes histológicos foram analisados qualitativa e quantitativamente. Os dados obtidos na histomorfometria foram submetidos à análise estatística (ANOVA e Teste de Tukey, p≤0,05) que revelou um maior preenchimento ósseo nos ratos machos, sobretudo aos sete e 28 dias, independente da utilização do medicamento. Evidenciou-se, ainda, maior grau de maturação do osso neoformado nos ratos machos. Concluiu-se que o tratamento com risedronato mostrou-se ineficaz na reparação óssea e que a diminuição hormonal causou maior prejuízo ao processo de neoformação óssea em fêmeas quando comparado aos efeitos da deficiência hormonal em machos.